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细胞培育实验室建设

发布时间:2021-05-15 17:11人气:
    安排细胞培育技能与其他一般试验室作业的首要区别在于要求坚持无菌操作,防止微生物及其他有害要素的影响。现在,超净作业台的广泛运用,很大程度上便利了安排细胞培育作业,并使一些常规试验室有可能用于进行细胞培育。
 
一、常规细胞培育室的设置和设备
 
1. 无菌操作室:
 
    由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成
 
    ⑴更衣间:位于培育室外部,用于更换洁净的衣帽鞋口罩。放置消毒的防护服、衣帽柜、鞋柜。
 
    ⑵缓冲间:位于更衣间与操作间之间,目的是为了确保操作间的无菌环境。放置电冰箱、液氮灌、消毒好的无菌物品等。 
 
    ⑶操作间:位于内部,专用于无菌操作、细胞培育。放置净化作业台及二氧化碳培育箱,离心机,倒置显微镜等。
 
    房间要求:独立房间,按洁净厂房要求制作,并需求坚持空气消毒和清洁无尘:
 
    紫外线灯—产生臭氧,而且室内温度及湿度均较高,不利于作业人员健康。
 
空气过滤的恒温恒湿设备—-,空气洁净度级别如下:
 
 
    注:空气洁净度级别表:一般一般培育室常选用100000级的
 
2. 预备室:常设置在无菌操作室外部,首要进行培育液及有关培育用的液体等的制备。首要设置:离心机、水浴锅、守时钟表、一般天平及日常分析处理物
 
3. 洗刷消毒间:要和其他区域分开,独立一室,首要用于各种培育器皿的清洗、预备和消毒,常设置:烘箱、高压蒸汽消毒锅、去离子水或者蒸馏水处理器、酸缸、水槽刷子等。 

 
二.常用的基本设备
 
1. 仪器:
 
   1). 超净作业台:操作简单,安装便利,占用空间小且净化效果很好。一般细菌培育室运用的净化作业台首要有两种:a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。
 
    净化作业台作业原理(大致相同)—-通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以均匀的断面风速经过无菌区,然后构成无尘无菌的高洁净度作业环境。
 
    侧流式作业台—-空气净化后的气流由左或右侧经过作业台面流向对侧,也有从上向下或从下向向对侧,构成气流屏障坚持作业区无菌。作业台结构为封闭式。
 
    外流式(水平式)作业台—-净化后的空气面向操作者活动,因此外方气流不致混入操作,但进行有害物质试验操作则对操作者不利。作业台结构为敞开式。
 
    2). 显微镜:倒置荧光显微镜,若有条件,尚可配置带有照相体系的高质量相差显微镜、解剖显微镜、录像体系或缩时电影拍照设备等,以便随时调查、记录、摄影细胞生长状况。
 
    3). CO2培育箱:CO2培育箱的优点是能够供给进行细胞培育时所需求的量的CO2(常用浓度为5%),易于使培育液的pH坚持稳定,适用于敞开或半敞开培育。
 
    4). 干燥箱:电热干燥箱升温较高,一般需到达160℃以上。
 
    5). 水纯化设备:产生去离子水,可用三蒸水替代。
 
    6). 冰箱:低温冰箱(-20℃)、超低温冰箱(-70,80C,)
 
    7). 液氮罐:挑选购置液氮容器时要综合考虑容积巨细,取放运用便利及液氮蒸发量(经济)三种要素。液氮容器的巨细可自25L~500L,能够贮存1ml的安瓿250~15000个左右。液氮温度可低达-196℃,运用时应防止冻伤。因为液氮不断蒸发,应注意调查存留液氮状况,及时定期弥补液氮,防止蒸发过多而致细胞受损。
 
    8). 离心机:进行细胞培育时,常规需求进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等作业,通常需求运用离心机。
 
    9). 精密电子天平:常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。
 
    10). 消毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。
 
    11). 滤器:现在细胞培育作业中选用的培育用液,包含人工合成培育液、血清、消化用等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因此上述液体多选用滤过消毒以除去细菌。
 
2. 常用的培育器皿:
 
    1). 培育瓶:由玻璃或塑料制成。首要用于培育、繁衍细胞。进行培育时培育瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培育。国产培育瓶的标准以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;进口培育瓶则多以底面积(cm2)表示。
 
    2). 培育皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理安排或做细胞毒性、集落构成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁衍等试验运用。常用的培育皿标准有10、9、6cm、3.5cm等。
 
    3). 多孔培育板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测验验运用。其优点是节省样本及试剂,可一起测验大量样本,易于进行无菌操作。培育板分为各种标准,常用的标准有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
 
    4). 培育操作有关的器皿:
 
      a). 贮液瓶:首要用于寄存或制造各种培育用液体如培育液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同标准,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
 
      b). 吸管:首要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管首要用于汲取、搬运液体,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等标准。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除能够作汲取、搬运液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
 
      c). 加样器(移液器):用于汲取、移动液体或滴加样本。可根据需求调节量的巨细,吸量准确、便利。尤以微量加样器,可确保试验样品(或试剂)含量,重复性良好。现在,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供运用者挑选,能确保加样准确、快速、便利而且到达无菌要求。
 
      d). 其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或暂时插置吸管用的试管,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于寄存小件培育物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同标准的注射器、烧杯和量筒以及漏斗,超净作业台运用的酒精灯,供试验人员操作前清洁消毒手运用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
 

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